E7 oncoprotein as a marker for persistence of human papillomavirus infection in patients with chronic cervicitis

Full Text

В ажная роль в возникновении предраковых состоя- ний принадлежит инфекционным агентам, среди ко- торых первое место занимает вирус папилломы че- ловека (ВПЧ). Большинство случаев инфицирования ВПЧ заканчиваются спонтанным выздоровлением, однако в не- которых случаях развивается персистирующая инфекция, которая способна запускать процессы клеточной транс- формации [1, 2]. Для развития неоплазий необходимо встраивание вирусной ДНК ВПЧ в геном эпителиальной клетки, что сопровождается синтезом ранних белков ВПЧ - Е6 и Е7. Онкогены Е6 и Е7 всегда выявляются в опу- холевых клетках, зараженных ВПЧ, в то время как другие фрагменты вирусного генома могут быть утеряны в про- цессе его длительной персистенции [3, 4]. Персистирую- щее течение папилломавирусной инфекции (ПВИ) уроге- нитального тракта сопровождается экспрессией онкобелка Е7 в 10,4 раза чаще, чем при транзиторном течении [5, 6]. Продолжительная продукция этих белков часто сопут- ствует переходу дисплазии в инвазивный цервикальный рак, что делает Е6 и Е7 наиболее привлекательными марке- рами для определения риска развития рака шейки матки. Таким образом, можно считать, что онкобелок Е7 ВПЧ 16 и 18-го типов является важным фактором канцерогенеза. В качестве перспективного метода диагностики ПВИ рас- сматривают определение онкобелков Е6 и Е7 в соскобах шейки матки, что позволяет дифференцировать стадию вирусного процесса [7]. Цель работы - проведение анализа и оценка значимо- сти онкобелка Е7 в течении ПВИ у женщин с хроническим цервицитом (ХЦ). Материалы и методы Данное исследование было проведено в период с 2011 по 2012 г. на базе поликлиники КГБУЗ «Городская больница», г. Уссурийск. Нами были обследованы 135 женщин в воз- расте от 18 до 35 лет. У всех женщин имел место ХЦ. Паци- ентки были распределены нами на 3 группы. В 1-ю группу вошли 49 женщин с ХЦ и наличием ВПЧ 16 и 18-го типа в цервикальном канале, 2-ю группу составили 32 пациентки с ХЦ и наличием в цервикальном канале ВПЧ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 6 и 11-го типов, в 3-ю группу вошли 54 пациентки с ХЦ без наличия ПВИ в цервикальном канале. Для цитологического исследования материал забирали из цервикального канала, переходной зоны и эндоцер- викса с помощью одноразовой щеточки. Оценку результа- тов цитологического исследования производили согласно классификационной системе Папаниколау в соотношении с классификацией Бетесда. Диагностика ПВИ у женщин проводилась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществлялись типирование ВПЧ (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 6 и 11-й типы) и определение кли- нически значимой концентрации 16 и 18-го типов ВПЧ в режиме реального времени для определения вирусной на- грузки (количество копий генетического материала вирус- ного патогена в анализируемом объеме). Для определения онкобелка Е7 у пациенток с ВПЧ 16 и 18-го типов с чувстви- тельностью порядка 1 нг/мл использовали диагностиче- ские тест-системы иммуноферментного анализа (ИФА). Осмотр шейки матки проводился при помощи зеркал и расширенной кольпоскопии. Расширенную кольпоскопию проводили по общепринятой методике на аппарате Olym- pus 500. Интерпретация кольпоскопической картины осу- ществлялась по Международной классификации кольпо- скопических терминов Рио-де-Жанейро (2011 г.). Это поз- волило выявить аномальные кольпоскопические картины (мозаика, пунктация, ацетобелый эпителий, атипичные со- суды) и другие образования (кондиломы, полипы) шейки матки. Гистологическое исследование проводилось по об- щепринятой методике. Верификация диагноза у пациенток с ХЦ была основана на данных клинического, лабораторного (цитологиче- ского, ПЦР, ИФА-диагностики) обследования, а также дан- ных кольпоскопии и результатах гистологического иссле- дования. Полученные результаты свидетельствовали о том, Таблица 1. Характеристика клинических симптомов у пациенток групп обследования Жалобы 1-я группа 2-я группа 3-я группа 49 % 32 % 54 % Нет 17 34,7±6,8*** 14 43,75±8,77 41 75,93±5,82 Бели 32 65,31±6,8*** 18 56,25±8,77 13 24,07±5,82 Боли 12 24,49±6,14 11 34,38±8,4 8 14,82±4,84 Зуд жжение 24 48,98±7,14*** 22 68,75±8,19 7 12,96±4,57 Контактные кровянистые выделения 7 14,29±4,5 3 9,38 - - ***p<0,001. Таблица 2. Параметры лабораторных методов обследования вагинального содержимого у пациенток с ХЦ Параметры 1-я группа 2-я группа 3-я группа 49 % 32 % 54 % pH 4,5 1 2,04 1 3,13 5 9,26±3, 94 <4,5 6 12,25±4,68** 5 15,63±6,42* 19 35,19±6,5 >4,5 42 85,72±5,0*** 26 81,25±7,66* 30 55,56±6,76 Лейкорея 30 61,23±6,96** 17 53,13±8,82 18 33,34±6,42 Дрожжеподобные грибы 26 53,07±7,13 18 56,25±8,77 26 48,15±6,8 Здесь и в табл. 3, 4: *p<0,05; **p<0,01; ***p<0,001. Таблица 3. Результаты цитологического исследования у пациенток с ХЦ Мазки на наличие атипических клеток 1-я группа 2-я группа 3-я группа 49 % 32 % 54 % Норма 6 12,25±4,68*** 6 18,75±6,9 24 44,45±6,76 Воспаление 13 26,53±6,31 9 28,13±7,95 20 37,03±6,57 ASCUS 12 24,49±6,14* 10 31,25±8,19* 5 9,26±3,95 LSIL 12 24,49±6,14* 6 18,75±6,9 5 9,26±3,95 HSIL 9 18,37±5,53 1 3,13 - - Инвазивная карцинома 2 4,09 - - - - что у всех пациенток 3 групп имел место ХЦ, который в 1 и 2-й группах протекал на фоне ПВИ. Результаты проведенных исследований были подверг- нуты методике статистической обработки с вычислением средней арифметической величины (М), средней арифме- тической ошибки (m) и достоверного различия между по- казателями (Р) с учетом достоверной вероятности по кри- терию Стьюдента-Фишера. Результаты и обсуждение Анализ жалоб пациенток с ХЦ (табл. 1) показал, что выделения из половых путей беспокоили 32 (65,31±6,8%) паци- ентки 1-й группы; 18 (56,25±8,77%) пациенток 2-й группы; 13 (24,07±5,82%) женщин 3-й группы (p<0,001). Зуд и жже- ние беспокоили 24 (48,98±7,14%) пациентки 1-й группы; 22 (68,75±8,19%) пациентки 2-й группы; 7 (12,96±4,57%) женщин 3-й группы (p<0,001). Отсутствовали жалобы у 17 (34,7±6,8%) пациенток 1-й группы, 14 (43,75±8,77%) па- циенток 2-й группы и 41 (75,93±5,82%) женщины 3-й группы (p<0,001). Результаты, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что наиболее выраженная клиническая симптоматика (бели, зуд и жжение), подтвержденная достоверными дан- ными, наблюдалась у пациенток с ХЦ и наличием ВПЧ 16 и 18-го типов (1-я группа). Данные микроскопии мазков (табл. 2) у 30 (61,23±6,96%) пациенток в 1-й группе, у 17 (53,13±8,82%) - во 2-й группе и у 18 (33,34±6,42%) - в 3-й группе выявили наличие лейко- реи (p<0,01). Грибы рода кандида встречались практически с одинаковой частотой в 3 группах и составили в 1-й группе 53,07±7,13%; во 2-й - 56,25±8,77%; в 3-й - 48,15±6,8%. Величина pH влагалища в 1-й группе была более 4,5 у 42 (85,72±5,0%) пациенток, во 2-й - у 26 (81,25±7,66%); в 3-й - у 30 (55,56±6,76%) женщин (p<0,001; p<0,05). Таким образом, у пациенток с ВПЧ 16 и 18-го типов достоверно чаще встречались лейкорея и повышение рН среды влагалища (см. табл. 2). По данным литературных источников, повышение рН способствует плоскоклеточной метаплазии шейки матки и сохраняет эпителий зоны трансформации в состоянии, уязвимом для ВПЧ-инфекции [6, 7]. Анализ данных цитологического исследования (табл. 3) показал наличие у 12 (24,49±6,14%) пациенток 1-й группы, у 10 (31,25±8,19%) пациенток 2-й группы и у 5 (9,26±3,95%) пациенток 3-й группы ASCUS (Atypical squamous cells of un- determined significance - атипичные клетки плоского эпи- телия неясного значения), что соответствует IIIа классу мазка по системе Папаниколау. LSIL (Low-grade squamous intraepithelial lesion - плоскоклеточное поражение шейки матки низкой степени) достоверно чаще встречалось в 1-й группе - у 12 (24,49±6,14%) женщин. Во 2-й группе LSIL была выявлена у 6 (18,75±6,9%), в 3-й группе - у 5 (9,26±3,95%) пациенток (p<0,05). HSIL (High-grade squa- mous intraepithelial lesion - плоскоклеточное поражение шейки матки высокой степени) выявлено у 9 пациенток 1-й группы и у 1 пациентки 2-й группы и составило 18,37±5,53% и 3,13% соответственно. Инвазивная карци- нома при цитологическом исследовании была выявлена в 1-й группе у 2 (4,09%) пациенток. Согласно данным обследования ВПЧ 16 и 18-го типов, а также их ассоциации встречались в 60,5±5,43% случаев, что было достоверно чаще (p<0,01), чем ВПЧ 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 6 и 11-го типов, частота распространения которых составила 39,51±5,43%. В 1-й группе ВПЧ 16-го типа был выявлен у 20 (40,82±7,02%) пациенток, ВПЧ 18-го типа - у 13 (26,53±6,31%), ассоциация 16 и 18-го типов - у 16 (32,66±6,7%). У пациенток 2-й группы с одинаковой частотой (3,13%,) встречались ВПЧ 39, 45, 58, 59-го типов. ВПЧ 33, 35-го ти- пов был выявлен в 6,25% случаев, 56-го типа - в 9,38%, 31 и 52-го - в 12,50±5,84%. ВПЧ 51-го типа был определен у 15,63±6,42% пациенток. ВПЧ 6-го типа встречался у 4 (6,9±3,33%) пациенток, а 11-го - у 3 (5,17%). Ассоциация нескольких типов ВПЧ составила 25,0±7,66%. Частота выявленного нами у пациенток ВПЧ Таблица 4. Результаты кольпоскопического исследования у пациенток с ХЦ 1-я группа 2-я группа 3-я группа 49 % 32 % 54 % *Нормальная кольпоскопическая картина: ЦЭ, ОПЖ, ЗПЖ 5 10,21±4,32*** 15 46,88±8,82 34 62,96±6,57 Аномальная кольпоскопическая картина 33 67,35±6,7*** 10 31,25±8,19 8 14,81±7,35 Степень поражения CIN I 24 48,98±7,14*(***) 8 25±7,66 8 14,81±7,35 Степень поражения CIN II 9 18,37±5,53* 2 6,25 - Кондиломы 5 10,21±4,32 5 15,63±6,42 - - Подозрение на инвазию 4 8,16±3,91 - - - Полипы шейки матки 2 4,09 2 6,25 4 7,41±3,56 Примечание. ЦЭ - цервикальная эктопия; ОПЖ - открытые протоки желез; ЗПЖ - закрытые протоки желез. Таблица 5. Результаты морфологического исследования биопсии шейки матки у пациенток с ХЦ 1-я группа 2-я группа 3-я группа 49 % 32 % 54 % Эндоцервикоз 30 61,22±6,96 22 68,75±8,19 15 27,78±6,1 Лейкоплакия 3 6,12 2 6,25 3 5,56 Кондиломы 2 4,08 3 9,38 - - CIN I 4 8,16±4,01 3 9,38 2 3,7 CIN II 6 12,25±4,68 2 6,25 - - CIN III 2 4,08 - - - - Рак in situ 1 2,04 - - - - Инвазивный рак 1 2,04 - - - - Биопсия не проводилась - - - - 34 62,96±6,57 16, 31, 52, 56-го типов совпадала с данными других иссле- дований [8]. В 1-й группе у 12 (24,49±6,14%) пациенток при обследова- нии был выявлен онкобелок Е7. У всех пациенток 1-й группы с наличием онкобелка Е7 клинически значимая концентра- ция вируса была в пределах (3,6±0,3 до 6,8±0,1 lg копий). При анализе результатов кольпоскопичекой картины (табл. 4) нормальная кольпоскопическая картина была вы- явлена у 5 (10,21±4,32%) пациенток 1-й группы, у 15 (46,88±8,82%) женщин 2-й группы, у 34 (62,96±6,57%) па- циенток 3-й группы (p<0,001). Аномальная кольпоскопиче- ская картина была выявлена в 1-й группе у 33 (67,35±6,7%), во 2-й группе - у 10 (31,25±8,19%), в 3-й группе - у 8 (14,81±7,35%) женщин (p<0,001; p<0,001). В 1-й группе у 24 (48,98±7,14%) пациенток кольпоскопическая картина соответствовала степени поражения I, у 9 (18,37±5,53%) пациенток - степени поражения II (p<0,05). Во 2-й группе у 8 (25±7,66%) пациенток выявлена степень по- ражения I и у 2 (6,25%) - степень поражения II. В 3-й группе встречалась только кольпоскопическая картина со степенью поражения I у 8 (14,81±7,35%) женщин. Подозрение на инва- зию было выявлено у 4 (8,16±3,91%) пациенток 1-й группы. Анализ результатов гистологического исследования (табл. 5) показал, что CIN (цервикальная интраэпителиаль- ная неоплазия) I имела место у 4 (8,16±4,01%) пациенток 1-й группы, из них у 3 было выявлено наличие белка Е7. Во 2-й группе CIN I была выявлена у 3 (9,38%) пациенток и у 2 (3,7%) женщин в 3-й группе. CIN II имела место в 1-й группе у 6 (12,25±4,68%) женщин, из них у 3 женщин опре- делялся белок Е7. CIN II при гистологическом обследовании была выявлена у 2 (6,25%) пациенток 2-й группы. CIN III была выявлена только у 2 (4,08%) пациенток 1-й группы, рак in situ - у 1 (2,04%) женщины, инвазивный рак - также у 1 (2,04%) пациентки. У всех женщин с CIN III, внутриэпителиальным инвазив- ным раком было определено наличие белка Е7 при обсле- довании. Во всех случаях морфологически установленного диагноза CIN II, CIN III, внутриэпителиального и инвазив- ного рака при ПЦР-диагностике был выявлен ВПЧ 16 и 18-го типов: у 7 (70±14,49%) и у 3 (30±14,49%) пациенток соответственно. Полученные нами результаты совпадают с литературными данными, где показано, что в 99,6% случаев рака шейки матки и CIN II/III отмечают наличие высокоонкогенных типов ВПЧ, из них в 69,5% превалирует ВПЧ 16-го типа [6]. Выводы У пациенток с ХЦ и наличием белка Е7 (24,49±6,14%) концентрация ВПЧ 16 и 18-го типов была клинически значимой и находилась в пределах (3,6±0,3 до 6,8±0,1 lg копий). При гистологическом заключении, свидетельствую- щем о наличии CIN I, CIN II, CIN III, внутриэпителиаль- ного и инвазивного рака, ВПЧ 16 и 18-го типов встре- чался в 85,71±9,35%, из них в 71,43±12,07% случаев при исследовании выявляется онкобелок Е7.

About the authors

T Y Pestrikova

J O Panfilova

Email: pan-love@mail.ru

References

Supplementary files