мРНК-вакцина, кодирующая гемагглютинин вируса гриппа A(H1N1)pdm09, доставленная с помощью безыгольной струйной инжекции, защищает мышей от летального заражения вирусом

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Сезонный грипп – это острое респираторное заболевание, вызываемое вирусами гриппа А и В, которые циркулируют по всему миру. Из-за высокой изменчивости ежегодно появляются новые штаммы вирусов. В связи с этим состав сезонных гриппозных вакцин приходится пересматривать ежегодно. Преимущества мРНК-вакцин заключаются в том, что их можно быстро производить, причем без предварительной адаптации вакцинного штамма к куриным эмбрионам. Представлены результаты получения и исследования вакцины мРНК-C3-H1, кодирующей гемагглютинин (HA) вируса гриппа А(H1N1)pdm09. Описано получение ДНК-матрицы для синтеза зрелой мРНК HA в одну стадию. Полученную мРНК очищали от примесей двухцепочечной РНК методом, основанным на использовании порошка целлюлозы. Эффективность вакцины оценивали на мышах линии BALB/c. Иммунизацию мышей проводили “голой” мРНК-вакциной с помощью струйного безыгольного инжектора. По результатам иммуноферментного анализа (ИФА) средний титр антител в сыворотке иммунизированных животных составил 4.6 × 105. Сыворотки иммунизированных животных нейтрализовали адаптированный к мышам вирус гриппа A/California/04/09 (H1N1) MA8, средний титр составил 6 × 102. Формирование Т-клеточного иммунного ответа продемонстрировано методом ELISpot. После стимуляции спленоцитов специфическими пептидами среднее количество Т-лимфоцитов, секретирующих интерферон-γ (IFN-γ), составило 236 на 106 клеток. Показано, что иммунизация мРНК-вакциной защищает мышей от заражения летальной дозой вируса гриппа A/California/04/09 (H1N1) MA8. Таким образом, экспериментальная вакцина мРНК-C3-H1 иммуногенна и предотвращает заболеваемость и смертность мышей после заражения гомологичным штаммом вируса гриппа.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

С. В. Шарабрин

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Автор, ответственный за переписку.
Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. А. Ильичёв

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Д. Н. Кисаков

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

М. Б. Боргоякова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Е. В. Старостина

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Л. А. Кисакова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. А. Исаева

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Д. Н. Щербаков

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

С. И. Красникова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. С. Гудымо

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

К. И. Иванова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

В. Ю. Марченко

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

В. А. Яковлев

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Е. В. Тигеева

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Т. Н. Ильичева

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Н. Б. Рудомётова

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. А. Фандо

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. П. Рудомётов

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

А. А. Сергеев

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Л. И. Карпенко

Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии “Вектор” Роспотребнадзора

Email: Sharabrin.sv@gmail.com
Россия, р. п. Кольцово, Новосибирская область, 630559

Список литературы

  1. Uyeki T.M., Hui D.S., Zambon M., Wentworth D.E., Monto A.S. (2022) Influenza. Lancet. 400(10353), 693–706. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(22)00982-5
  2. Ohmit S.E., Thompson M.G., Petrie J.G., Thaker S.N., Jackson M.L., Belongia E.A., Zimmerman R.K., Gaglani M., Lamerato L., Spencer S.M., Jackson L., Meece J.K., Nowalk M.P., Song J., Zervos M., Cheng P.Y., Rinaldo C.R., Clipper L., Shay D.K., Piedra P., Monto A.S. (2014) Influenza vaccine effectiveness in the 2011–2012 season: protection against each circulating virus and the effect of prior vaccination on estimates. Clin. Infect. Dis. 58(3), 319‒327. https://doi.org/10.1093/cid/cit736
  3. Wei C.J., Crank M.C., Shiver J., Graham B.S., Mascola J.R., Nabel G.J. (2020) Next-generation influenza vaccines: opportunities and challenges. Nat. Rev. Drug Discov. 19(6), 239–252. https://doi.org/10.038/s4573-020-0066-8
  4. Scorza F.B., Pardi N. (2018) New kids on the block: RNA-based influenza virus vaccines. Vaccines (Basel). 6(2), 20. https://doi.org/10.3390/vaccines6020020
  5. Zhang C., Maruggi G., Shan H., Li J. (2019) Advances in mRNA vaccines for infectious diseases. Front. Immunol. 10, 594. https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.00594
  6. Pardi N., Hogan M.J., Porter F.W., Weissman D. (2018) mRNA vaccines – a new era in vaccinology. Nat. Rev. Drug Discov. 7(4), 261‒279. https://doi.org/10.1038/nrd.2017.243
  7. Vogel A.B., Kanevsky I., Che Y., Swanson K.A., Muik A., Vormehr M., Kranz L.M., Walzer K.C., Hein S., Güler A., Loschko J., Maddur M.S., Ota-Setlik A., Tompkins K., Cole J., Lui B.G., Ziegenhals T., Plaschke A., Eisel D., Dany S.C., Fesser S., Erbar S., Bates F., Schneider D., Jesionek B., Sänger B., Wallisch A.K., Feuchter Y., Junginger H., Krumm S.A., Heinen A.P., Adams-Quack P., Schlereth J., Schille S., Kröner C., de la Caridad Güimil Garcia R., Hiller T., Fischer L., Sellers R.S., Choudhary S., Gonzalez O., Vascotto F., Gutman M.R., Fontenot J.A., Hall-Ursone S., Brasky K., Griffor M.C., Han S., Su A.A.H., Lees J.A., Nedoma N.L., Mashalidis E.H., Sahasrabudhe P.V., Tan C.Y., Pavliakova D., Singh G., Fontes-Garfias C., Pride M., Scully I.L., Ciolino T., Obregon J., Gazi M., Carrion R. Jr., Alfson K.J., Kalina W.V., Kaushal D., Shi P.Y., Klamp T., Rosenbaum C., Kuhn A.N., Türeci Ö., Dormitzer P.R., Jansen K.U., Sahin U. (2021) BNT162b vaccines protect rhesus macaques from SARS-CoV-2. Nature. 592(7853), 283–289. https://doi.org/10.1038/s41586-021-03275-y
  8. Chan L., Alizadeh K., Alizadeh K., Fazel F., Kakish J.E., Karimi N., Knapp J.P., Mehrani Y., Minott J.A., Morovati S., Rghei A., Stegelmeier A.A., Vanderkamp S., Karimi K., Bridle B.W. (2021) Review of influenza virus vaccines: the qualitative nature of immune responses to infection and vaccination is a critical consideration. Vaccines (Basel). 9(9) 979. https://doi.org/10.3390/vaccines9090979
  9. Walsh E.E., Frenck R.W. Jr., Falsey A.R., Kitchin N., Absalon J., Gurtman A., Lockhart S., Neuzil K., Mulligan M.J., Bailey R., Swanson K.A., Li P., Koury K., Kalina W., Cooper D., Fontes-Garfias C., Shi P.Y., Türeci Ö., Tompkins K.R., Lyke K.E., Raabe V., Dormitzer P.R., Jansen K.U., Şahin U., Gruber W.C. (2020) Safety and immunogenicity of two RNA-based Covid-19 vaccine candidates. N. Engl. J. Med. 383(25), 2439–2450. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2027906
  10. Teo S.P. (2022) Review of COVID-19 mRNA vaccines: BNT162b2 and mRNA-1273. J. Pharm. Pract. 35(6), 947–951. https://doi.org/10.1177/08971900211009650
  11. Freyn A.W., Pine M., Rosado V.C., Benz M., Muramatsu H., Beattie M., Tam Y.K., Krammer F., Palese P., Nachbagauer R., McMahon M., Pardi N. (2021) Antigen modifications improve nucleoside-modified mRNA-based influenza virus vaccines in mice. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 22, 84–95. https://doi.org/10.1016/j.omtm.2021.06.003
  12. Mazunina E.P., Gushchin V.A., Kleymenov D.A., Siniavin A.E., Burtseva E.I., Shmarov M.M., Mukasheva E.A., Bykonia E.N., Kozlova S.R., Evgrafova E.A., Zolotar A.N., Shidlovskaya E.V., Kirillova E.S., Krepkaia A.S., Usachev E.V., Kuznetsova N.A., Ivanov I.A., Dmitriev S.E., Ivanov R.A., Logunov D.Y., Gintsburg A.L. (2024) Trivalent mRNA vaccine-candidate against seasonal flu with cross-specific humoral immune response. Front. Immunol. 15, 1381508. https://doi.org/10.3389/fimmu.2024.1381508
  13. Joe P.T., Christopoulou I., van Hoecke L., Schepens B., Ysenbaert T., Heirman C., Thielemans K., Saelens X., Aerts J.L. (2019) Intranodal administration of mRNA encoding nucleoprotein provides cross-strain immunity against influenza in mice. J. Transl. Med. 17(1), 242. https://doi.org/10.1186/s12967-019-1991-3
  14. Zhuang X., Qi Y., Wang M., Yu N., Nan F., Zhang H., Tian M., Li C., Lu H., Jin N. (2020) mRNA vaccines encoding the HA protein of influenza A H1N1 virus delivered by cationic lipid nanoparticles induce protective immune responses in mice. Vaccines (Basel). 8(1), 123. https://doi.org/10.3390/vaccines8010123
  15. Kackos C.M., DeBeauchamp J., Davitt C.J.H., Lonzaric J., Sealy R.E., Hurwitz J.L., Samsa M.M., Webby R.J. (2023) Seasonal quadrivalent mRNA vaccine prevents and mitigates influenza infection. NPJ Vaccines. 8(1), 157. https://doi.org/10.1038/s41541-023-00752-5
  16. Tian Y., Deng Z., Chuai Z., Li C., Chang L., Sun F., Cao R., Yu H., Xiao R., Lu S., Xu Y., Yang P. (2024) A combination influenza mRNA vaccine candidate provided broad protection against diverse influenza virus challenge. Virology. 596, 110125. https://doi.org/10.1016/j.virol.2024.110125
  17. Li Y., Wang X., Zeng X., Ren W., Liao P., Zhu B. (2023) Protective efficacy of a universal influenza mRNA vaccine against the challenge of H1 and H5 influenza A viruses in mice. mLife. 2(3), 308–316. https://doi.org/10.1002/mlf2.12085
  18. Nitika, Wei J., Hui A.M. (2022) The delivery of mRNA vaccines for therapeutics. Life (Basel). 12(8), 1254. https://doi.org/10.3390/life12081254
  19. Ramachandran S., Satapathy S.R., Dutta T. (2022) Delivery strategies for mRNA vaccines. Pharm. Med. 36(1), 11–20. https://doi.org/10.1007/s40290-021-00417-5
  20. Buschmann M.D., Carrasco M.J., Alishetty S., Paige M., Alameh M.G., Weissman D. (2021) Nanomaterial delivery systems for mRNA vaccines. Vaccines (Basel). 9(1), 65. https://doi.org/10.3390/vaccines9010065
  21. Kim B., Hosn R.R., Remba T., Yun D., Li N., Abraham W., Melo M.B., Cortes M., Li B., Zhang Y., Dong Y., Irvine D.J. (2023) Optimization of storage conditions for lipid nanoparticle-formulated self-replicating RNA vaccines. J. Control. Release. 353, 241–253. https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2022.11.022
  22. Tsilingiris D., Vallianou N.G., Karampela I., Liu J., Dalamaga M. (2022) Potential implications of lipid nanoparticles in the pathogenesis of myocarditis associated with the use of mRNA vaccines against SARS-CoV-2. Metabol. Open. 13, 100159. https://doi.org/10.1016/j.metop.2021.100159
  23. Wilczewska A.Z., Niemirowicz K., Markiewicz K.H., Car H. (2012) Nanoparticles as drug delivery systems. Pharmacol. Rep. 64(5), 1020–1037. https://doi.org/10.1016/s1734-1140(12)70901-5
  24. Eygeris Y., Gupta M., Kim J., Sahay G. (2022) Chemistry of lipid nanoparticles for RNA delivery. Acc. Chem. Res. 55(1), 2–12. https://doi.org/10.1021/acs.accounts.1c00544
  25. Fraiman J., Erviti J., Jones M., Greenland S., Whelan P., Kaplan R.M., Doshi P. (2022) Serious adverse events of special interest following mRNA COVID-19 vaccination in randomized trials in adults. Vaccine. 40(40), 5798–5805. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2022.08.036
  26. Giannotta G., Murrone A., Giannotta N. (2023) COVID-19 mRNA vaccines: the molecular basis of some adverse events. Vaccines (Basel). 11(4), 747. https://doi.org/10.3390/vaccines11040747
  27. Parés-Badell O., Martínez-Gómez X., Pinós L., Borras-Bermejo B., Uriona S., Otero-Romero S., Rodrigo-Pendás J.Á., Cossio-Gil Y., Agustí A., Aguilera C., Campins M. (2021) Local and systemic adverse reactions to mRNA COVID-19 vaccines comparing two vaccine types and occurrence of previous COVID-19 infection. Vaccines (Basel). 9(12), 463. https://doi.org/10.3390/vaccines9121463
  28. Dey A., Chozhavel Rajanathan T.M., Chandra H., Pericherla H.P.R., Kumar S., Choonia H.S., Bajpai M., Singh A.K., Sinha A., Saini G., Dalal P., Vandriwala S., Raheem M.A., Divate R.D., Navlani N.L., Sharma V., Parikh A., Prasath S., Sankar Rao M., Maithal K. (2021) Immunogenic potential of DNA vaccine candidate, ZyCoV-D against SARS-CoV-2 in animal models. Vaccine. 39(30), 4108–4116. https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2021.05.098
  29. Kwilas S., Kishimori J.M., Josleyn M., Jerke K., Ballantyne J., Royals M., Hooper J.W. (2014) A hantavirus pulmonary syndrome (HPS) DNA vaccine delivered using a spring-powered jet injector elicits a potent neutralizing antibody response in rabbits and nonhuman primates. Curr. Gene Ther. 14(3), 200–210. https://doi.org/10.2174/1566523214666140522122633
  30. Hu J., Shi H., Zhao C., Li X., Wang Y., Cheng Q., Goswami R., Zhen Q., Mei M., Song Y., Yang S., Li Q. (2016) Lispro administered by the QS-M Needle-Free Jet Injector generates an earlier insulin exposure. Expert Opin. Drug Deliv. 13(9), 1203–1207. https://doi.org/10.1080/17425247.2016.1198772
  31. Kwon T.R., Seok J., Jang J.H., Kwon M.K., Oh C.T., Choi E.J., Hong H.K., Choi Y.S., Bae J., Kim B.J. (2016) Needle-free jet injection of hyaluronic acid improves skin remodeling in a mouse model. Eur. J. Pharm. Biopharm. 105, 69–74. https://doi.org/10.1016/j.ejpb.2016.05.014
  32. Ravi A.D., Sadhna D., Nagpaal D., Chawla L. (2015) Needle free injection technology: a complete insight. Int. J. Pharm. Investig. 5(4), 192–199. https://doi.org/10.4103/2230-973X.167662
  33. Scheib N., Tiemann J., Becker C., Probst H.C., Raker V.K., Steinbrink K. (2022) The dendritic cell dilemma in the skin: between tolerance and immunity. Front. Immunol. 13, 929000. https://doi.org/10.3389/fimmu.2022.929000
  34. Brocato R.L., Kwilas S.A., Kim R.K., Zeng X., Principe L.M., Smith J.M., Hooper J.W. (2021) Protective efficacy of a SARS-CoV-2 DNA vaccine in wild-type and immunosuppressed Syrian hamsters. NPJ Vaccines. 6(1), 16. https://doi.org/10.1038/s41541-020-00279-z
  35. Alamri S.S., Alluhaybi K.A., Alhabbab R.Y., Basabrain M., Algaissi A., Almahboub S., Alfaleh M.A., Abujamel T.S., Abdulaal W.H., ElAssouli M.Z., Alharbi R.H., Hassanain M., Hashem A.M. (2021) Synthetic SARS-CoV-2 spike-based DNA vaccine elicits robust and long-lasting Th1 humoral and cellular immunity in mice. Front. Microbiol. 12, 727455. https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.727455
  36. Abbasi S., Matsui-Masai M., Yasui F., Hayashi A., Tockary T.A., Mochida Y., Akinaga S., Kohara M., Kataoka K., Uchida S. (2024) Carrier-free mRNA vaccine induces robust immunity against SARS-CoV-2 in mice and non-human primates without systemic reactogenicity. Mol. Ther. 32(5), 1266–1283. https://doi.org/10.1016/j.ymthe.2024.03.022
  37. Кисаков Д.Н., Кисакова Л.А., Шарабрин С.В., Яковлев В.А., Тигеева Е.В., Боргоякова М.Б., Старостина Е.В., Зайковская А.В., Рудометов А.П., Рудометова Н.Б., Карпенко Л.И., Ильичев А.А. (2023) Доставка экспериментальной мРНК-вакцины, кодирующей RBD SARS-CoV-2 с помощью струйной инжекции. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 176(12), 751–756. https://doi.org/10.47056/0365-9615-2023-176-12-751-756
  38. Шарабрин С.В., Бондарь А.А., Старостин E.B., Кисаков Д.Н. Кисакова Л.А., Задорожный А.М, Рудометов А.П., Ильичев А.А., Карпенко Л.И. (2023) Удаление примесной дцРНК из препарата синтезированной матричным синтезом мРНК. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 176(12), 723–728. https://doi.org/10.47056/0365-9615-2023-176-12-723-728
  39. Karpenko L.I., Rudometov A.P., Sharabrin S.V., Shcherbakov D.N., Borgoyakova M.B., Bazhan S.I., Volosnikova E.A., Rudometova N.B., Orlova L.A., Pyshnaya I.A., Zaitsev B.N., Volkova N.V., Azaev M.S., Zaykovskaya A.V., Pyankov O.V., Ilyichev A.A. (2021) Delivery of mRNA vaccine against SARS-CoV-2 using a polyglucin: spermidine conjugate. Vaccines (Basel). 9(2), 76. https://doi.org/10.3390/vaccines9020076
  40. Gross F.L., Bai Y., Jefferson S., Holiday C., Levine M.Z. (2017) Measuring influenza neutralizing antibody responses to A(H3N2) viruses in human sera by microneutralization assays using MDCK-SIAT1 cells. J. Vis. Exp. 129, 56448. https://doi.org/10.3791/56448
  41. Portal M.M., Pavet V., Erb C., Gronemeyer H. (2015) Human cells contain natural double-stranded RNAs with potential regulatory functions. Nat. Struct. Mol. Biol. 22, 89–97.
  42. Weissman D., Pardi N., Muramatsu H., Karikó K. (2013) HPLC purification of in vitro transcribed long RNA. Methods Mol. Biol. 969, 43–54. https://doi.org/10.1007/978-1-62703-260-5_3
  43. Chen Y., Lin J., Zhao Y., Ma X., Yi H. (2021) Toll-like receptor 3 (TLR3) regulation mechanisms and roles in antiviral innate immune responses. J. Zhejiang Univ. Sci. B. 22(8), 609–632. https://doi.org/10.1631/jzus.B2000808
  44. Karikó K., Muramatsu H., Welsh F.A., Ludwig J., Kato H., Akira S., Weissman D. (2008) Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability. Mol. Ther. 16(11), 1833–1840. https://doi.org/10.1038/mt.2008.200
  45. Adibzadeh S., Fardaei M., Takhshid M.A., Miri M.R., Rafiei Dehbidi G., Farhadi A., Ranjbaran R., Alavi P., Nikouyan N., Seyyedi N., Naderi S., Eskandari A., Behzad-Behbahani A. (2019) Enhancing stability of destabilized green fluorescent protein using chimeric mRNA containing human beta-globin 5ꞌ and 3ꞌ untranslated regions. Avicenna J. Med. Biotechnol. 11(1), 112–117.
  46. Cao J., Novoa E.M., Zhang Z., Chen W.C.W., Liu D., Choi G.C.G., Wong A.S.L., Wehrspaun C., Kellis M., Lu T.K. (2021) High-throughput 5’ UTR engineering for enhanced protein production in non-viral gene therapies. Nat. Commun. 12(1), 4138. https://doi.org/10.1038/s41467-021-24436-7
  47. Yu J., Russell J.E. (2001) Structural and functional analysis of an mRNP complex that mediates the high stability of human beta-globin mRNA. Mol. Cell Biol. 21(17), 5879–5888. https://doi.org/10.1128/MCB.21.17.5879-5888.2001
  48. Ferizi M., Aneja M.K., Balmayor E.R., Badieyan Z.S., Mykhaylyk O., Rudolph C., Plank C. (2016) Human cellular CYBA UTR sequences increase mRNA translation without affecting the half-life of recombinant RNA transcripts. Sci. Rep. 6, 39149. https://doi.org/10.1038/srep39149
  49. Keshavarz M., Mirzaei H., Salemi M., Momeni F., Mousavi M.J., Sadeghalvad M., Arjeini Y., Solaymani-Mohammadi F., Sadri Nahand J., Namdari H., Mokhtari-Azad T., Rezaei F. (2019) Influenza vaccine: where are we and where do we go? Rev. Med. Virol. 29(1), e2014. https://doi.org/10.1002/rmv.2014
  50. Armbruster N., Jasny E., Petsch B. (2019) Advances in RNA vaccines for preventive indications: a case study of a vaccine against rabies. Vaccines (Basel). 7(4), 132. https://doi.org/10.3390/vaccines7040132
  51. Sonoda J., Mizoguchi I., Inoue S., Watanabe A., Sekine A., Yamagishi M., Miyakawa S., Yamaguchi N., Horio E., Katahira Y., Hasegawa H., Hasegawa T., Yamashita K., Yoshimoto T. (2023) A promising needle-free pyro-drive jet injector for augmentation of immunity by intradermal injection as a physical adjuvant. Int. J. Mol. Sci. 24(10), 9094. https://doi.org/10.3390/ijms24109094
  52. Хромова Е.А., Ахматова Н.К., Костинов М.П., Сходова С.А., Столпникова В.Н., Власенко А.Е., Полищук В.Б., Шмитько А.Д. (2023) Влияние иммуноадъювантной и безадъювантных вакцин против гриппа на иммунофенотип лимфоцитов in vitro. Инфекция и иммунитет. 13(3), 430–438. https://doi.org/10.15789/2220-7619-TIO-1250

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Схема плазмиды, кодирующей мРНК НА вируса гриппа A(H1N1), и анализ экспрессируемого целевого продукта. а – Карта плазмиды pVAX-C3-H1-PolyA. Показан фрагмент гена HA (1608 п. н.) и фрагмент ДНК, соответствующий кодируемому транскрипту мРНК (1920 п. н.). б – Электрофоретическое разделение мРНК-C3-H1 в 2%-ном агарозном геле: 1 – мРНК до чистки, 2 – маркер ssRNA Ladder (“New England Biolabs”, США), 3 – мРНК после очистки. в – Индукция IFN-α очищенной и не очищенной от примесей дцРНК мРНК у мышей линии BALB/c (n = 5). Фоновый уровень IFN-α в сыворотке крови контрольной группы представлен пунктирной линией. Активация CD4+ (г) и CD8+ (д) Т-лимфоцитов у мышей после стимуляции разными фракциями целевой мРНК в сравнении с контролем (интактные мыши). Результаты представлены как процентное содержание соответственно CD3+CD4+ и CD3+CD8+ Т-лимфоцитов, несущих маркер ранней активации CD69+. Данные получены методом проточной цитометрии. Результаты выражены как медиана с разбросом. Данные проанализированы с использованием непараметрического критерия Краскела–Уоллиса (*p < 0.01). е – Иммуноанализ дот-блот с антителами к дцРНК: мРНК до очистки (1), мРНК после очистки (2), дцРНК (3, положительный контроль). ж – Иммуноблот-анализ культуральной среды клеток HEK293: 1 – нетрансфицированные клетки (отрицательный контроль), 2 – трансфицированные мРНК-С3-H1 клетки, 3 – рекомбинантный белок HA H1 (положительный контроль), 4 – маркер молекулярной массы белков Precision Plus Protein Dual Color Standards (“Bio-Rad”, США).

Скачать (54KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Дизайн эксперимента по иммунизации мышей. ИФА – иммуноферментный анализ, ВН – анализ вируснейтрализующей активности.

Скачать (33KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Анализ гуморального иммунного ответа у вакцинированных мышей BALB/c. а – Титры НА-специфичных IgG-антител в сыворотках мышей (n = 10 в каждой группе). ИФА проводили с использованием в качестве антигена рекомбинантного белка HA вируса гриппа H1N1. К‒ – отрицательный контроль. б – Титры Флю-М-специфичных IgG-антител в сыворотках мышей (n = 10 в каждой группе). ИФА проводили с использованием в качестве антигена вакцины Флю-М. Достоверность рассчитана с использованием непараметрического анализа Манна–Уитни. в – Вируснейтрализующая активность сывороток мышей, иммунизированных указанными препаратами (n = 8 в каждой группе). Все результаты выражены как медиана с разбросом. Достоверность рассчитана с использованием непараметрического критерия Краскела‒Уоллиса. Статистический анализ проведен с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 8.0. *p < 0.0001, **p < 0.001.

Скачать (31KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Анализ Т-клеточного иммунного ответа у вакцинированных мышей BALB/c (n = 5 в каждой группе) методом ELISpot. Результаты представлены как число спотобразующих единиц (SFU) на 106 клеток. Достоверность рассчитана с использованием непараметрического анализа Манна–Уитни. Статистический анализ проведен с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 8.0. *р < 0.01.

Скачать (10KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Анализ протективной эффективности мРНК-вакцины. а – Выживаемость мышей BALB/c (n = 10 в каждой группе), иммунизированных мРНК-C3-H1 или Флю-М, после заражения вирусом гриппа A/California/04/09 (H1N1) MA8. Контроль – неиммунизированные животные. Моделирование функции выживания проводили с помощью множительной оценки Каплана–Мейера, сравнение с выживаемостью в контрольной группе – с помощью критерия Мантеля–Кокса. б – Динамика изменений веса мышей в ходе эксперимента.

Скачать (17KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2025