The influence of biopharmaceutical Klimalanin on the secretory synthetic kinesis of the blood monocytes/macrophages

Full Text

Введение Особенностью климактерического периода является то, что наряду с выключением репродуктивной функции раз- виваются возрастные и патологические изменения во мно- гих органах и тканях, возникают и проявляются разные за- болевания: опухоли, психозы, неврозы, ожирение, вегето- сосудистые расстройства [1, 2]. К настоящему времени на- коплено много сведений о том, что дефицит эстрогенов приводит к появлению у большей части женщин приливов, повышенной ночной потливости, к развитию урогениталь- ной атрофии, снижающим качество жизни женщины [3]. Дисфункция яичников у перименопаузальных женщин ха- рактеризуется повышенным уровнем гонадотропинов в крови, в большей степени - фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), необходимого для стимуляции немногих оставшихся фолликулов, у которых снизилась эстроген- продуцирующая способность. Известно, что полноценность функционирования ре- продуктивной системы определяется взаимодействием эн- докринной и иммунной систем организма [4]. Так, на плаз- матической мембране макрофагов описаны рецепторы для эстрогенов, прогестерона, других стероидных гормонов [5]. Стимуляция возникновения макрофагов сопряжена с действием экзогенных неспецифических и специфиче- ских иммунных факторов [6]. Среди экзогенных неспеци- фических факторов, активизирующих функции мононук- леарных фагоцитов, важное значение имеют лекарствен- ные препараты. Некоторые из них оказывают стимулирую- щее влияние на фагоцитоз и лизосомные ферменты фаго- цитирующих клеток (левамизол), другие - стабилизирую- щее действие на лизосомные мембраны фагоцитов (спле- нин, глюкокортикоиды) [7]. Основным методом лечения климактерических рас- стройств в настоящее время является заместительная гор- мональная терапия (ЗГТ). Ее использование эффективно купирует вазомоторные симптомы (приливы, гипергидроз, тахикардию и пр.), нормализует сон, улучшает общее самочувствие, а также предупреждает развитие атрофических изменений в урогенитальном тракте [8]. Но назначение ЗГТ требует оценки исходного состояния здоровья женщины и факторов риска возможных заболеваний, индивидуаль- ного подбора дозы, времени начала и путей введения гор- монов. Альтернативой ЗГТ является лечение приливов не- гормональным препаратом Клималанин на основе β-ала- нина производства компании «Бушара Рекордати». Прове- денное нами ранее клиническое исследование доказало высокую эффективность препарата для лечения вазомо- торных симптомов климактерического периода. Цель работы - изучить влияние Клималанина на со- стояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, секреторно-синте- тическую активность этих клеток для предупреждения воз- можных осложнений. Материалы и методы Исследованы моноциты крови и перитонеальные макрофаги у 39 женщин пременопаузального периода (45-52 лет, средний возраст 48,5±3,2 года). Первую группу составили 16 здоровых женщин без признаков климактерического синдрома (КС). Во 2-ю группу вошли 23 женщины с жалобами на приливы до 10-15 раз в сутки. Этим пациенткам был назначен Клималанин перо- рально по 2 таблетки в сутки в течение 2 мес. Обследова- ние женщин с КС проводилось накануне приема препа- рата и после курса лечения. Пациентки наблюдались в КГБУЗ Владивостокский клинический родильный дом №3 г. Владивостока. На все исследования было получено информированное согласие. Выделение моноцитов крови проводилось на гради- енте плотности фиколл-верографина центрифугирова- нием крови в течение 30 мин при 400 G с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента [9]. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 мин при 37°С. Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взя- той методом пункций заднего влагалищного свода, также выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла. Концентрацию клеток считали в камере Горяева и дово- дили стерильным физиологическим раствором до 6×106 кл/мл. Определение стабильности лизосомных мем- бран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом показателя стабильности (ПСЛМ) проводили ме- тодом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5% стерильного L-глутамина и 2,5% смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56°С, в течение 12-15 ч - при 37°С. Микрометодом [10] про- водили определение секретированного лизоцима (Lсекр), а после 4-6-кратного замораживания-оттаивания культиви- руемых клеток - общего лизоцима (Lобщ = Lсекр + L внутрикле- точный). На основании полученных результатов секретиро- ванного и общего лизоцима высчитывали ПСЛМ по фор- муле: ПСЛМ = Lсекр / Lобщ × 100%. Повышение ПСЛМ выше оптимального значения (53-58%) расценивалось как лабилизация лизосомных мембран, снижение этого показателя - как стабилизация мембран. По результатам оценки разницы Lобщ после и до культивирования определяли количество синтезирован- ного лизоцима (Lсинт) [11]. Проведенные ранее исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Оптимальное значение ПСЛМ (53-58%) отмечено на 19-21-й день менструального цикла. Так как у обследован- ных женщин отмечался нерегулярный менструальный цикл, забор материала проводился в день обращения (у женщин, не получавших лечение Клималанином). Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ Statistica 6 с применением стандартных методов вариационной стати- стики и критерия Манна-Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р<0,05 [12]. Результаты В результате проведенных исследований выявлено, что состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторно-син- тетическая активность имеют различия у женщин без про- явления КС и при его развитии (табл.1). Как видно из полученных данных, у женщин с КС по сравнению со здоровыми имеет место лабилизация лизо- сомных мембран моноцитов крови и перитонеальных мак- рофагов (p<0,01). Прием препарата Клималанин в течение 2 мес, напротив, вызывает стабилизацию лизосомных мем- бран этих клеток (p<0,05) (табл. 2). Одновременно с лабилизацией лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у женщин с КС наблюдается повышение секреторной активности этих клеток (p<0,01). Как результат стабилизации лизосом- ных мембран моноцитов/макрофагов на фоне приема пре- парата Клималанин можно расценить заметное снижение в них секреторной активности (p<0,01 - для моноцитов крови и p>0,05 - для перитонеальных макрофагов). При этом синтетическая активность моноцитов крови и пери- тонеальных макрофагов у женщин с КС снижена, причем это снижение более выражено у перитонеальных макрофа- гов (p<0,001). Прием Клималанина ведет к заметному воз- растанию синтеза лизоцима в перитонеальных макрофагах (p<0,01) и в большей степени - в моноцитах крови (p<0,001) (табл. 3). Обсуждение В результате проведенного исследования выявлено, что состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови перитонеальных макрофагов, их секреторно-синте- тическая активность изменяются у женщин с КС по сравне- нию со здоровыми женщинами. Вероятно, это связано с гормональными изменениями в пременопаузальном пе- риоде, в частности с повышением уровня ФСГ. Известно, что Таблица 2. Уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у здоровых женщин, женщин с КС до и после лечения Клималанином Группы сравнения Lсекр моноцитов (M±m) Lсекр макрофагов (M±m) Здоровые женщины 1 p1 0,75±0,03 0,9±0,07 Женщины с КС 2 p2 0,84±0,01p1-p2 ** 1,5±0,18p1-p2 ** Женщины, получавшие Клималанин 3 3 0,63±0,031 3p2-p3 ** 0,79±0,011 3p2-p3 * *p>0,05; **p<0,01 - достоверность различий между сравниваемыми группами. p p -p ** p -p * Таблица 1. ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых женщин, женщин с КС до и после лечения Клималанином Группы сравнения ПСЛМ моноцитов (M±m) ПСЛМ макрофагов (M±m) Здоровые женщины 1 p1 53,8±1,3 59,6±1,4 Женщины с КС 2 p2 59,7±1,4p1-p2** 65,8±1,5p1-p2 ** Женщины, получавшие Клималанин 3 3 47,6±1,61 3p2-p3** 52,4±2,11 3p2-p3* *p<0,05; **p<0,01 - достоверность различий между сравниваемыми группами. p p -p ** p -p * p p -p *** p -p ** Таблица 3. Уровень синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами у здоровых женщин, женщин с КС до и после лечения Клималанином Группы сравнения Lсинт моноцитов (M±m) Lсинт макрофагов (M±m) Здоровые женщины 1 p1 0,44±0,01 0,7±0,012 Женщины с КС 2 p2 0,39±0,02p1-p2** 0,62±0,015p1-p2 *** Женщины, получавшие Клималанин 3 3 0,52±0,021 3p2-p3 ** 0,77±0,0181 3p2-p3 ** **p<0,01, ***p<0,001 - достоверность различия между сравниваемыми группами. действие ФСГ на клеточные рецепторы опосредуется акти- вацией циклического аденозинмонофосфата, что, как пра- вило, стимулирует синтетические процессы в клетках [13]. Лизосомомембранотропный эффект, наблюдаемый при ко- лебании уровня ФСГ, может быть связан с изменением обра- зования эстрадиола, находящегося в прямой зависимости от ФСГ и обладающего лабилизирующим действием в отно- шении лизосомных мембран макрофагальных клеток [14]. Действие негормонального препарата Клималанин на мо- ноциты крови и перитонеальные макрофаги, возможно, но- сит опосредованный характер. Воздействуя на уровне ре- цепторов терморегуляторного центра гипоталамуса, он приводит к изменению уровня нейротрансмиттеров, при- нимающих участие в выделении гормонов гипофиза, в част- ности ФСГ. Уменьшение уровня этого гормона ведет к ста- билизации лизосомных мембран моноцитов крови и пери- тонеальных макрофагов, снижению секреции и увеличе- нию синтеза лизоцима этими клетками. Таким образом, по- лученные данные позволяют расширить представление о механизме дополнительного действия Клималанина на макрофагальные клетки. При лечении женщин с КС необхо- димо учитывать иммунотропное действие препарата, спо- собное вносить коррективы в работу иммунной системы, в частности ее макрофагального звена.

About the authors

I A Khramova

Email: irhramova@mail.ru

E E Sluysareva

Email: slu-elena@bk.ru

References

Supplementary files