Возможности неинвазивного резус-генотипирования плода для использования в амбулаторной практике


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель исследования - оптимизация подходов к курации беременных с резус-отрицательным типом крови при использовании неинвазивного метода определения резус-генотипирования плода по крови матери. В результате проведенного исследования в группе из 204 беременных с резус-отрицательным типом крови в сроках 14-27 нед с применением неинвазивного метода резус-генотипирования было показано, что чувствительность метода неинвазивного определения резус-принадлежности плода составляет 99,0%. Определение резус-принадлежности плода позволяет персонифицировать проведение иммунопрофилактики у беременных с резус-отрицательным типом крови.

Полный текст

Одним из приоритетных направлений современ- ного акушерства является персонификация подхо- дов к ведению гестационного процесса, включающая выявление риска развития и проведение своевремен- ной профилактики осложнений, а также, при необходимо- сти, выбор оптимальной для каждого пациента лечебной тактики. Несовместимость по резус-фактору между резус-отрица- тельной матерью, вынашивающей резус-положительный плод, остается основной причиной возникновения гемоли- тической болезни плода и новорожденного [1-3]. Концепция запланированного введения антирезусного иммуноглобулина на антенатальном этапе и после родоразрешения способствовала существенному сниже- нию резус-сенсибилизации [4-6]. В то же время в европей- ской популяции частота рождения резус-отрицательных новорожденных при резус-отрицательном типе крови у матери достигает 41%, и, соответственно, при своевремен- ной и качественной диагностике резус-принадлежности плода можно было бы избежать нерациональной иммуно- профилактики [7, 8]. Оценка резус-принадлежности плода в настоящее время возможна с применением как инвазивных, так и неинва- зивных подходов. В течение последних 30 лет проводится поиск неинвазивных методов в диагностике состояний плода, что позволило снизить риск возникновения ослож- нений от инвазивных процедур и затраты на ведение бере- менности [9]. После открытия Y.Lo и соавт. в 1997 г. сво- бодно циркулирующей эмбриональной ДНК в кровотоке матери начались исследования по возможности предик- ции осложнений гестационного процесса, с одной сто- роны, и неинвазивной пренатальной диагностики - с дру- гой. Одной из задач неинвазивной пренатальной диагностики, основанной на применении молекулярно-генетиче- ских методов исследования, является определение резус- принадлежности плода [10]. Целью данного исследования явилась оптимизация подходов к ведению беременных с резус-отрицательным типом крови при применении неинвазивного метода опре- деления резус-фактора плода. Материалы и методы Нами были обследованы 204 резус-отрицательных жен- щин при резус-положительном супруге. Принадлежность к резус-фактору определяли стандартными серологиче- скими методами. Критериями включения пациенток в ис- следование являлись наличие резус-отрицательной группы крови без признаков сенсибилизации, вынашивание бере- менности от резус-положительного супруга; гестационный возраст 14-27 нед, считая от 1-го дня менструации. В ис- следование не включались пациентки при наличии резус- сенсибилизации. Беременные находились на амбулатор- ном наблюдении в научно-поликлиническом отделении ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова» или в женской кон- сультации при ГБУЗ ГП №195. Проведение исследования было одобрено этическим комитетом ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова». Все пациентки предоставляли инфор- мированное согласие на проведение неинвазивного резус- генотипирования плода. Обследование и ведение беремен- ных проводилось в соответствии с Порядком оказания аку- шерско-гинекологической помощи. Забор крови для определения резус-принадлежности плода осуществлялся из кубитальной вены в сроки 14-27 нед беременности. Определение проводилось в лаборато- рии молекулярно-генетических методов ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова». Для молекулярно-генетических исследований у беремен- ных использовали периферическую кровь, собранную в пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой в каче- стве антикоагулянта. Плазму получали методом двойного центрифугирования: вначале проводили осаждение фор- менных элементов при 3000 g в течение 10 мин, далее полу- ченную плазму отбирали и повторно центрифугировали при 13 000 g в течение 5 мин. ДНК получали из 500 мкл плазмы с использованием реагентов для выделения ДНК «Проба-ГС» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Выявление гена RHD проводилось методом полимераз- ной цепной реакции в режиме реального времени с ис- пользованием набора реагентов для выявления ДНК плода в крови матери методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Пренатальная диагностика. Резус-фактор» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Реакцию амплификации и оценку результатов делали на программируемом амплификаторе «ДТ-96» (ООО «ДНК- Технология», Россия) согласно инструкции. Резус-принадлежность новорожденных определялась в родовспомогательных учреждениях иммунологическими методами непосредственно после родов. Результаты и обсуждение Средний возраст беременных в группе составлял 30,2±4,7 года. Первобеременные составили 47,5%, повторнобере- менные - 52,5%. Все беременные были обследованы со- гласно медицинским стандартам, при отсутствии резус-ан- тител проведено неинвазивное резус-генотипирование плода в сроке от 14 до 27 нед беременности. Результаты ис- следования показали, что в 151 (74,0%) случае был выявлен RHD-ген. Всем новорожденным после рождения была определена группа и резус-принадлежность крови, резус-положитель- ными были 151 (74,0%) и резус-отрицательными - 53 (26,0%) новорожденных. Несовпадение результатов анте- натального и постнатального определения резус-принад- лежности имело место в 2 случаях - в одном из них резус- положительный плод был определен как резус-отрицатель- ный и в другом - резус-отрицательный - как резус-поло- жительный. Таким образом, чувствительность составила 99,30 (96,4-100)%, специфичность - 98,10 (89,9-100)%. Точность метода неинвазивного резус-генотипирования - 99,0%. Согласно данным разных авторов проведение неинва- зивного резус-генотипирования обладает достаточно вы- соким уровнем чувствительности, достигающим 94,8-100% [9-12]. Результаты нашего исследования позволяют сделать вы- вод о целесообразности и эффективности определения резус-принадлежности плода с помощью определения сво- бодной эмбриональной ДНК во II триместре беременно- сти, что, соответственно, позволит персонифицировать подходы к ведению беременности, ограничить необходи- мость многократного определения антител у части резус- отрицательных беременных, избирательно проводить ан- тенатальное профилактическое введение антирезусного иммуноглобулина, а в ряде ситуаций избежать проведения инвазивных вмешательств в период беременности.
×

Об авторах

Саида Магомедовна Махмудова

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России; ГБУЗ Городская поликлиника №195 Департамента здравоохранения г. Москвы

врач акушер-гинеколог ГБУЗ ГП №195, НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 121614, Россия, Москва, ул. Крылатские холмы, д. 51

Станислав Владиславович Павлович

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

Email: st.pavlovich@mail.ru
ученый секретарь ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Дмитрий Юрьевич Трофимов

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

зав. лаб. молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Андрей Евгеньевич Донников

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

ст. науч. сотр. лаб. молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Леонид Закиевич Файзуллин

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

вед. науч. сотр. лаб. молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Анна Александровна Дьяконова

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

ст. науч. сотр. 2-го отд-ния акушерского патологии беременности ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Виталий Николаевич Карнаухов

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И.Кулакова Минздрава России

мл. науч. сотр. лаб. молекулярно-генетических методов ФГБУ НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4

Список литературы

  1. Mollison P.L, Engelfriet C.P, Contreras M. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 10th ed. Oxford, Blackwell Science Ltd., 1997.
  2. Lo Y.M, Hjelm N.M, Fidler C et al. Prenatal diagnosis of fetal RhD status by molecular analysis of maternal plasma. N Engl J Med 1998; 339: 1734-8.
  3. Clausen F.B, Krog G.R, Rieneck K et al. Reliable test for prenatal prediction of fetal RhD type using maternal plasma from RhD negative women. Prenat Diagn 2005; 25: 1040-4.
  4. Engelfriet C.P, Reesink H.W, Judd W.J et al. Current status of immunoprophylaxis with anti-D immunoglobin.Vox Sang 2003; 85: 328-37.
  5. Flegel W.A, Wagner F.F. Molecular genetics of RH. Vox Sang 2000; 78 (Suppl. 2): 109-15.
  6. Mackenzie I.Z, Roseman F, Findlay J et al. The kinetics of routine antenatal prophylactic intramuscular injections of polyclonal anti-D immunoglobulin. BJOG 2006; 113: 97-101.
  7. Daniels G. Human Blood Groups, 2nd ed. Oxford, Blackwell Science Ltd., 2002.
  8. Van der Schoot C.E, Soussan A.A, Koelewijn J et al. Noninvasive antenatal RHD typing. Transfus Clin Biol 2006; 13: 53-7.
  9. Тетруашвили Н.К., Федорова Н.И., Файзуллин Л.З., Карнаухов В.Н. Определение свободной эмбриональной ДНК в плазме крови беременных для неинвазивной пренатальной генетической диагностики. Акуш. и гинекол. 2012; 6: 4-8.
  10. Finning K.M, Martin P.G, Soothill P.W, Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfus 2002; 42 (8): 1079-85.
  11. Rouillac-Le Sciellour C, Puillandre P, Gillot R et al. Largescale pre - diagnosis study of fetal RHD genotyping by PCR on plasma DNA from RhD-negative pregnant women. Mol Diagn 2004; 8 (1): 23-31.
  12. Minon J.M, Gerard C, Senterre J.M et al. Routine fetal RHD genotyping with maternal plasma: a four - year experience in Belgium. Transfus 2008; 48 (2): 373-81.
  13. Hromadnikova I, Vechetova L, Vesela K et al. Non - invasive fetal RHD exon 7 and exon 10 genotyping using real - time PCR testing of fetal DNA in maternal plasma. Fetal Diagn Ther 2005; 20 (4): 275-80.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© ООО "Консилиум Медикум", 2016

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС77-63961 от 18.12.2015.


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах