Non-invasive fetal RHD determination in out-patient practice


Cite item

Full Text

Abstract

The aim of the study was to improve approaches to the use of Rh0(D) immune globulin in pregnant women with Rh-negative blood by introducing noninvasive method of determination of fetal rhesus blood factor by mother’s blood into curation program of pregnancy at risk of RBC sensitization. The accuracy of noninvasive method of rhesus genotyping in 204 pregnant women with Rh negative blood in 14-27 weeks of pregnancy was 99.0%. The determination of fetal rhesus allows personify implementation of immunological prophylaxis in Rh negative pregnant women.

Full Text

Одним из приоритетных направлений современ- ного акушерства является персонификация подхо- дов к ведению гестационного процесса, включающая выявление риска развития и проведение своевремен- ной профилактики осложнений, а также, при необходимо- сти, выбор оптимальной для каждого пациента лечебной тактики. Несовместимость по резус-фактору между резус-отрица- тельной матерью, вынашивающей резус-положительный плод, остается основной причиной возникновения гемоли- тической болезни плода и новорожденного [1-3]. Концепция запланированного введения антирезусного иммуноглобулина на антенатальном этапе и после родоразрешения способствовала существенному сниже- нию резус-сенсибилизации [4-6]. В то же время в европей- ской популяции частота рождения резус-отрицательных новорожденных при резус-отрицательном типе крови у матери достигает 41%, и, соответственно, при своевремен- ной и качественной диагностике резус-принадлежности плода можно было бы избежать нерациональной иммуно- профилактики [7, 8]. Оценка резус-принадлежности плода в настоящее время возможна с применением как инвазивных, так и неинва- зивных подходов. В течение последних 30 лет проводится поиск неинвазивных методов в диагностике состояний плода, что позволило снизить риск возникновения ослож- нений от инвазивных процедур и затраты на ведение бере- менности [9]. После открытия Y.Lo и соавт. в 1997 г. сво- бодно циркулирующей эмбриональной ДНК в кровотоке матери начались исследования по возможности предик- ции осложнений гестационного процесса, с одной сто- роны, и неинвазивной пренатальной диагностики - с дру- гой. Одной из задач неинвазивной пренатальной диагностики, основанной на применении молекулярно-генетиче- ских методов исследования, является определение резус- принадлежности плода [10]. Целью данного исследования явилась оптимизация подходов к ведению беременных с резус-отрицательным типом крови при применении неинвазивного метода опре- деления резус-фактора плода. Материалы и методы Нами были обследованы 204 резус-отрицательных жен- щин при резус-положительном супруге. Принадлежность к резус-фактору определяли стандартными серологиче- скими методами. Критериями включения пациенток в ис- следование являлись наличие резус-отрицательной группы крови без признаков сенсибилизации, вынашивание бере- менности от резус-положительного супруга; гестационный возраст 14-27 нед, считая от 1-го дня менструации. В ис- следование не включались пациентки при наличии резус- сенсибилизации. Беременные находились на амбулатор- ном наблюдении в научно-поликлиническом отделении ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова» или в женской кон- сультации при ГБУЗ ГП №195. Проведение исследования было одобрено этическим комитетом ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова». Все пациентки предоставляли инфор- мированное согласие на проведение неинвазивного резус- генотипирования плода. Обследование и ведение беремен- ных проводилось в соответствии с Порядком оказания аку- шерско-гинекологической помощи. Забор крови для определения резус-принадлежности плода осуществлялся из кубитальной вены в сроки 14-27 нед беременности. Определение проводилось в лаборато- рии молекулярно-генетических методов ФГБУ «НЦАГиП им. акад. В.И.Кулакова». Для молекулярно-генетических исследований у беремен- ных использовали периферическую кровь, собранную в пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой в каче- стве антикоагулянта. Плазму получали методом двойного центрифугирования: вначале проводили осаждение фор- менных элементов при 3000 g в течение 10 мин, далее полу- ченную плазму отбирали и повторно центрифугировали при 13 000 g в течение 5 мин. ДНК получали из 500 мкл плазмы с использованием реагентов для выделения ДНК «Проба-ГС» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Выявление гена RHD проводилось методом полимераз- ной цепной реакции в режиме реального времени с ис- пользованием набора реагентов для выявления ДНК плода в крови матери методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени «Пренатальная диагностика. Резус-фактор» (ООО «ДНК-Технология», Россия). Реакцию амплификации и оценку результатов делали на программируемом амплификаторе «ДТ-96» (ООО «ДНК- Технология», Россия) согласно инструкции. Резус-принадлежность новорожденных определялась в родовспомогательных учреждениях иммунологическими методами непосредственно после родов. Результаты и обсуждение Средний возраст беременных в группе составлял 30,2±4,7 года. Первобеременные составили 47,5%, повторнобере- менные - 52,5%. Все беременные были обследованы со- гласно медицинским стандартам, при отсутствии резус-ан- тител проведено неинвазивное резус-генотипирование плода в сроке от 14 до 27 нед беременности. Результаты ис- следования показали, что в 151 (74,0%) случае был выявлен RHD-ген. Всем новорожденным после рождения была определена группа и резус-принадлежность крови, резус-положитель- ными были 151 (74,0%) и резус-отрицательными - 53 (26,0%) новорожденных. Несовпадение результатов анте- натального и постнатального определения резус-принад- лежности имело место в 2 случаях - в одном из них резус- положительный плод был определен как резус-отрицатель- ный и в другом - резус-отрицательный - как резус-поло- жительный. Таким образом, чувствительность составила 99,30 (96,4-100)%, специфичность - 98,10 (89,9-100)%. Точность метода неинвазивного резус-генотипирования - 99,0%. Согласно данным разных авторов проведение неинва- зивного резус-генотипирования обладает достаточно вы- соким уровнем чувствительности, достигающим 94,8-100% [9-12]. Результаты нашего исследования позволяют сделать вы- вод о целесообразности и эффективности определения резус-принадлежности плода с помощью определения сво- бодной эмбриональной ДНК во II триместре беременно- сти, что, соответственно, позволит персонифицировать подходы к ведению беременности, ограничить необходи- мость многократного определения антител у части резус- отрицательных беременных, избирательно проводить ан- тенатальное профилактическое введение антирезусного иммуноглобулина, а в ряде ситуаций избежать проведения инвазивных вмешательств в период беременности.
×

About the authors

S M Makhmudova

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation; City clinical hospital №195 of the Department of Health of Moscow

121614, Russian Federation, Moscow, ul. Krylatskie kholmy, d. 51

S V Pavlovich

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

Email: st.pavlovich@mail.ru
117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

D Iu Trofimov

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

A E Donnikov

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

L Z Faizulin

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

A A D'iakonova

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

V N Karnaukhov

V.I.Kulakov Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology of the Ministry of Health of the Russian Federation

117997, Russian Federation, Moscow, ul. Akademika Oparina, d. 4

References

  1. Mollison P.L, Engelfriet C.P, Contreras M. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 10th ed. Oxford, Blackwell Science Ltd., 1997.
  2. Lo Y.M, Hjelm N.M, Fidler C et al. Prenatal diagnosis of fetal RhD status by molecular analysis of maternal plasma. N Engl J Med 1998; 339: 1734-8.
  3. Clausen F.B, Krog G.R, Rieneck K et al. Reliable test for prenatal prediction of fetal RhD type using maternal plasma from RhD negative women. Prenat Diagn 2005; 25: 1040-4.
  4. Engelfriet C.P, Reesink H.W, Judd W.J et al. Current status of immunoprophylaxis with anti-D immunoglobin.Vox Sang 2003; 85: 328-37.
  5. Flegel W.A, Wagner F.F. Molecular genetics of RH. Vox Sang 2000; 78 (Suppl. 2): 109-15.
  6. Mackenzie I.Z, Roseman F, Findlay J et al. The kinetics of routine antenatal prophylactic intramuscular injections of polyclonal anti-D immunoglobulin. BJOG 2006; 113: 97-101.
  7. Daniels G. Human Blood Groups, 2nd ed. Oxford, Blackwell Science Ltd., 2002.
  8. Van der Schoot C.E, Soussan A.A, Koelewijn J et al. Noninvasive antenatal RHD typing. Transfus Clin Biol 2006; 13: 53-7.
  9. Тетруашвили Н.К., Федорова Н.И., Файзуллин Л.З., Карнаухов В.Н. Определение свободной эмбриональной ДНК в плазме крови беременных для неинвазивной пренатальной генетической диагностики. Акуш. и гинекол. 2012; 6: 4-8.
  10. Finning K.M, Martin P.G, Soothill P.W, Avent N.D. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfus 2002; 42 (8): 1079-85.
  11. Rouillac-Le Sciellour C, Puillandre P, Gillot R et al. Largescale pre - diagnosis study of fetal RHD genotyping by PCR on plasma DNA from RhD-negative pregnant women. Mol Diagn 2004; 8 (1): 23-31.
  12. Minon J.M, Gerard C, Senterre J.M et al. Routine fetal RHD genotyping with maternal plasma: a four - year experience in Belgium. Transfus 2008; 48 (2): 373-81.
  13. Hromadnikova I, Vechetova L, Vesela K et al. Non - invasive fetal RHD exon 7 and exon 10 genotyping using real - time PCR testing of fetal DNA in maternal plasma. Fetal Diagn Ther 2005; 20 (4): 275-80.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download

Copyright (c) 2016 Consilium Medicum

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
СМИ зарегистрировано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор).
Регистрационный номер и дата принятия решения о регистрации СМИ: серия ПИ № ФС77-63961 от 18.12.2015.


This website uses cookies

You consent to our cookies if you continue to use our website.

About Cookies